基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立

• 作者: 刘甦苏 吴曦 周舒雅 左琴 李保文 王辰飞 范昌发
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 条件性基因敲入 hRas基因 Cre-LoxP系统 癌症
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-28
• 页数: 8页
• 分类号: Q789
• 字数: 5688字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2018.04.003

摘要

目的 构建基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲人人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究.方法 首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导人C57BL/6 J小鼠囊胚,移人同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠.再将杂合予hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasn/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg (EⅡa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EⅡa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平.结果 成功构建了基于Cre-LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率＞50％的雄鼠与野生型C57BL/6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasf1/n小鼠与Tg (EⅡa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5～15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达.结论 成功建立运用Cre-LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EⅡa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲人小鼠模型做好技术储备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	左琴		8	4	1.0	1.0
2	李保文		13	20	3.0	3.0
3	范昌发		14	20	2.0	4.0
4	周舒雅		7	11	2.0	3.0
5	刘甦苏		9	4	1.0	1.0
6	王辰飞		6	2	1.0	1.0
7	吴曦		2	2	1.0	1.0