枣黑斑病菌绿色荧光蛋白标记菌株的构建

• 作者: 王兰 王廷松 王鹏程 郭俊玲
• 来源期刊: 塔里木大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 枣黑斑病菌 农杆菌介导转化 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 生物资源研究
• 页码范围: 7-11
• 页数: 5页
• 分类号: S435.79
• 字数: 3088字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0568.2018.02.002

摘要

以枣黑斑病菌和含有双元载体根癌农杆菌为材料,对分生孢子悬浮液的浓度、农杆菌液浓度、菌株共培养时间、共培养温度等条件进行优化,筛选出枣黑斑病菌遗传转化的最佳体系.以农杆菌介导枣黑斑病菌最佳的遗传转化体系为基础,进行GFP标记实验室保存枣黑斑病菌的菌落,继代培养后,通过观察菌落生长形态,生长速度以及致病力测定筛选获得遗传相对稳定、与野生枣黑斑病菌相比性状没有发生明显变化的荧光蛋白标记菌株.挑取单菌落于10 ml的LB液体培养基(含100μg·ml-1卡那霉素)中,28℃震荡(180 r/min)培养48 h,吸取400μl培养液于20 ml含有200μmol·L-1的AS(乙酰丁香酮,ace-tosyringone)、100μg·ml-1卡那霉素的AIM液体培养基中,28℃震荡(180 r/min)培养5～6 h共培养.将Alternaria alternata菌株所产的孢子洗下,制成浓度为1.0×106个/ml的悬浮液.分别取上述农杆菌液与孢子悬浮液各100μl均匀混合,涂布于含有200μmol·L-1 AS和100μg·ml-1卡那霉素的AIM平板上的硝酸纤维化膜(NC膜)表面,在25℃下黑暗共培养60 h,然后将NC膜转到含有潮霉素B的PDA平板上4～7天,获得约200个转化子,获得GFP标记的菌株.