池蝶蚌STAT基因的克隆及功能分析

• 作者: 周伟 洪一江 王军花 王小敏 盛军庆 舒福兴 高沁
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 池蝶蚌 HsSTAT 生物信息学分析 亚细胞定位 荧光原位杂交 qPCR 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 页码范围: 284-292
• 页数: 9页
• 分类号: Q718
• 字数: 7083字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2018.036

摘要

为了探究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)信号转导及转录激活因子STAT基因的初步功能,通过RACE-PCR技术首次在池蝶蚌中获得STAT的cDNA全长序列(GenBank ID:KY123702),命名为HsSTAT,HsSTAT全长为2752 bp, 5′-非编码区(5′UTR)为121bp, 3′-非编码区3′UTR为264 bp, 开放阅读框(ORF)为2367 bp, 编码788个氨基酸; 生物信息学分析发现该蛋白结构域主要由STAT_int、STAT_alpha、STAT_bind、SH2四个经典保守性功能域组成; 缬氨酸最多占12.9%.色氨酸使用频率为100%.二级结构中α螺旋最多占46.83%、β折叠最少占8.5%.HsSTAT蛋白亲水性指数为- 0.531, 是亲水性蛋白.预测到棕榈酰化修饰位点1个, 小泛素相关修饰序列3个, 磷酸化修饰位点22个.系统进化树分析显示, HsSTAT与光滑双脐螺STAT5B和盘鲍STAT5聚在一支;亚细胞定位结果显示HsSTAT定位于血细胞的细胞质中;荧光原位杂交结果显示HsSTAT主要在细胞核.qPCR结果显示HsSTAT在所有的组织中均有表达, 其在组织中的表达量在肝胰腺中最高, 在血细胞中最低.细胞增殖实验显实验组增殖率为119%,高于对照组.实验已克隆到HsSTAT的全长序列,HsSTAT可能为STAT5亚型, 具有促进SMCC-7721细胞增殖的功能, 推测具有池蝶蚌细胞的信号转导功能参与池蝶蚌的先天免疫.