caf1基因为靶标的鼠疫检测PCR法的改进

• 作者: 宋志忠 张艳 揭云翠 李伟 王鹏 董珊珊 郭英 钟佑宏
• 来源期刊: 中华地方病学杂志
• 关键词: caf1基因 耶尔森菌,鼠疫 聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 203-206
• 页数: 4页
• 字数: 3184字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-4255.2018.03.007

摘要

目的 查明行业标准推荐caf1基因引物(简称行标caf1引物)进行PCR检测时,在一些非鼠疫菌上出现非特异性条带的原因,并提出解决办法.方法 共选取112株菌进行试验,其中鼠疫菌40株、非鼠疫菌72株;提取菌株DNA,并对caf1基因进行PCR扩增;选择出现非特异性条带的7株菌株,进行切胶回收、纯化以及TA克隆测序;针对caf1基因重新设计引物,对被试菌株进行验证.结果 使用行标caf1引物扩增40株鼠疫菌,均未出现非特异性条带,扩增72株非鼠疫菌,有58株扩增出400、500、600、700、800、900、1000 bp的非特异性条带.经克隆和测序,在非特异性产物的基因序列中均出现行标caf1引物的反向引物序列及反向引物的反向互补序列.重新设计caf1引物,扩增72株非鼠疫菌,均未出现非特异性条带.结论 行标caf1引物在筛查鼠疫菌时会出现非特异性条带,使用新caf1引物可有效避免这一情况,提高检测的准确性.