基于非对称流场流分离系统优化脂蛋白的分离条件

• 作者: 吴迪 宋宇 朱尘琪 梁启慧 邱百灵 郭爽 韩南银 高也 高杨亚雅
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 非对称流场流分离 脂蛋白 正交设计试验
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 564-571
• 页数: 8页
• 分类号: R917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2018.03.029

摘要

目的:使用自组装非对称流场流分离(asymmetrical flow field-flow fractionation,AF4)仪器对脂蛋白的分离条件进行优化,分析仪器的分离性能并验证载液黏度对分离效果的影响.方法:使用2种标准蛋白(碳酸酐酶和甲状腺球蛋白)初步验证自组装非对称流场流分离仪器的性能,标定分离通道相关参数(压制后的分离通道实际高度),进而通过四水平五因素的正交设计试验进行脂蛋白的分离条件优化,通过直观分析和方差分析评价差异具有统计学意义的影响因素,并对这些影响因素进行深入验证分析.结果:通过调节流速条件及载液条件得到碳酸酐酶和甲状腺球蛋白混合样品的分离图,根据流体动力学原理及Stoke's公式计算得到分离通道高度为164 μm.使用正交设计试验得到优化后的分离条件可实现高密度脂蛋白与低密度脂蛋白大于1.50的分离度(分离度为1.61和1.58),所选取的5种主要影响因素及其水平分别为分离总流速(3.00,3.50,4.00,4.50 mL/min)、聚焦时间(3.00,3.50,4.00,4.50 min)、过渡时间(0.5,1.0,1.5,2.0 min)、载液pH(6.8,7.00,7.20,7.40)、载液黏度(使用不同浓度的羟丙基甲基纤维素调节载液黏度,其浓度分别为0.00％,0.03％,0.06％,1.00％),正交设计试验结果显示,5种主要因素中载液黏度对分离度影响最大,结果差异具有统计学意义.进一步分析载液黏度的影响,发现增大黏度可有效提高分离度,但会带来增大负峰的作用.结论:自组装非对称流场流分离仪器可根据颗粒的粒径差异对脂蛋白进行有效分离,在优化的条件下可实现高、低密度脂蛋白的基线分离,载液黏度对分离度的影响差异具有统计学意义.