血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白转基因猪的研究

• 作者: 潘登科 王梦佳 田兴华
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 异种移植 血栓调节蛋白 特异性表达 五指山小型猪
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 556-563
• 页数: 8页
• 分类号: S188|Q812
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.04.002

摘要

生理条件下,血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)可与凝血酶结合成复合物,该复合物既可通过激活蛋白C达到抗凝和促纤溶作用;又可经内皮细胞胞吞,通过细胞内溶酶体降解、清除体内凝血酶.另外,TM可与凝血因子Xa特异性结合,抑制凝血酶原的活化,进而使凝血酶的生成速率明显降低.移植后,猪(Sus scrofa)的血管暴露在人(Homo sapiens)血液中,猪TM无法与人的凝血酶发生结合从而使凝血功能紊乱,因此,在猪体内表达人TM是目前解决凝血功能异常的一个新的思路.本研究制备了血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的转基因克隆猪,研究了hTM在五指山小型猪血管内皮细胞表达情况.利用Red重组系统从细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)上抓捕获得猪的内源TM启动子.PCR扩增获得hTM的cDNA及牛生长素PolyA(bGHpA)序列,依次酶切连入pBlueScriptⅡSK(-),构建血管内皮特异性表达hTM的载体.获得的载体pBS-h TM-puro经Xho Ⅰ线性化,电转染五指山小型猪胎儿成纤维细胞,经1.0 μg/mL嘌呤霉素筛选10～15 d得到339个转hTM基因的阳性克隆,取两个生长较好的克隆用于核移植,随后获得重构胚972枚.胚胎移植后产仔猪5头;其中4头经基因组DNA、组织RT-PCR检验为阳性,Western blot结果显示hTM为血管内皮细胞特异性表达.成功获得可特异性表达hTM转基因细胞系及转基因克隆猪,为解决异种器官移植后出现的凝血紊乱问题提供了资料基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田兴华	河南大学生命科学学院生化与分子生物学实验室	4	11	2.0	3.0