牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 刘加波 庞耀珊 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 三重二温式PCR 牛支原体 牛病毒性腹泻病毒 传染性鼻气管炎病毒 检测
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 43-48
• 页数: 6页
• 分类号: S858.23|S854.43
• 字数: 5065字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.02.008

摘要

为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法.根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5'端非编码区(5'-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV 3种常见牛呼吸道传染病痛原的三重二温式PCR.结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727 bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10 000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板.研究所建立的MB、BVDV和IBRV三重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值.