牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 张民秀 张艳芳 曾婷婷 李丹 李孟 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 二重二温式PCR 牛支原体 牛病毒性腹泻病毒 检测
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 70-75
• 页数: 6页
• 分类号: S854.43
• 字数: 3834字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2019.01.018

摘要

为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvrC基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法.该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp.特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响.综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查.