牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量 PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 张民秀 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 双重荧光定量PCR TaqMan探针 检测
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 20-25
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3|Q789
• 字数: 5504字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2019.03.004

摘要

为建立基于Taq Man探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的Taq Man探针,1对BVDV的特异性引物和1条ROX标记的Taq Man探针,建立双重荧光定量PCR检测IBRV和BVDV的方法.对建立的检测方法进行特异性和敏感性测定,并用临床样品进行检测验证.特异性试验结果显示,该方法检测参试的IBRV毒株,在波长530μm(FAM)时收集到特异性荧光信号曲线,检测参试的BVDV毒株,在610μm(ROX)时收集到特异性荧光信号曲线,无交叉信号出现,对照的毒株无论是在530μm(FAM),还是610μm(ROX)处,均无荧光信号曲线出现,方法的特异性好;敏感性试验结果显示,该双重荧光定量PCR可检测到100个拷贝的IBRV和BVDV质粒DNA模板;临床样品检测结果表明,对保存在-70℃的127份牛病料样品核酸进行检测,IBRV阳性12份,BVDV阳性26份,IBRV和BVDV同为阳性2份,为混合感染,检测的拷贝数分别为6.24×105和6.32×104拷贝/μL.阳性样品经序列比对分析,分别与IBRV和BVDV的序列100％同源.建立的双重实时荧光定量PCR方法检测IBRV和BVDV具有特异、敏感等优点,可用于临床样品的鉴别检测.