禽源多杀性巴氏杆菌毒力基因多重PCR检测方法的建立

• 作者: 何贤发 冯方东 徐一凡 施文文 薛梦琦 郭伟娜 高博
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 禽源多杀性巴氏杆菌 毒力基因 多重PCR 检测
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 分类号: S852.612
• 字数: 4481字
• 语种: 中文

摘要

为建立多重PCR方法用于禽源多杀性巴氏杆菌中毒力基因的检测,对禽源多杀性巴氏杆菌分离株MD-1的9个毒力基因进行PCR扩增及敏感性测定,然后通过多个基因的组合得到5种多重 PCR 体系,并从中筛选合适的多重PCR体系,测定其特异性、敏感性和重复性.结果显示,分离株 MD-1中的9个毒力基因均可扩增出目的片段,敏感性测定结果表明,有的基因可检测至1.81×104copies/μL 的核酸.筛选出的4种多重PCR体系1、3或4、5均可用于其中6个毒力基因(pfhA、nanB、ompH、oma87、sodA、sodC)的检测,并且特异性较强,均能够扩增禽源多杀性巴氏杆菌分离株 HN-1和 CZ-6,而大肠埃希菌和沙门菌分离株均无扩增条带.多重PCR体系1、3、4可检测多杀性巴氏杆菌核酸的敏感性为1.81×106copies/μL,多重PCR体系5甚至可检测至1.81×105copies/μL,同时这4种多重PCR体系与单个毒力基因PCR 检测的敏感性均一致.说明建立的禽源多杀性巴氏杆菌毒力基因的多重 PCR 检测方法对多杀性巴氏杆菌毒力基因的快速检测有参考价值.