山羊伪结核棒状杆菌PMA-PCR检测方法的建立

• 作者: 付利芝 张素辉 李鹏飞 许国洋 陈朝洪 龙小飞
• 来源期刊: 现代畜牧兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 伪结核棒状杆菌 PMA PCR 活细菌检测 共价交联
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 9-13
• 页数: 5页
• 分类号: S858.27
• 字数: 3214字
• 语种: 中文

摘要

本试验旨在建立伪结核棒状杆菌的活菌检测方法,为临床检测及疫病防控提供理论依据.利用PMA可选择性穿透死菌细胞膜,在强光作用下与死菌DNA共价交联,阻止以其DNA为模板的PCR扩增这一原理,将PMA与PCR鉴定相结合,并对PMA最佳曝光时间、最适工作浓度进行优化,建立伪结核棒状杆菌PMA-PCR活菌检测方法,并对其特异性进行分析.结果表明最佳曝光时间为15 min,PMA能够完全抑制死菌PCR扩增的最低浓度为20 μmol/L,不抑制活菌PCR扩增的最大PMA浓度为30 μmol/L.特异性试验结果显示,仅伪结核棒状杆菌可扩增出目的条带,而在链球菌、多杀性巴氏杆菌中未扩增出目的条带.对不同比例的死/活菌检测发现,该方法可以有效针对活菌进行检测,活菌的最低检测浓度为1×104cfu/mL.本研究为伪结核棒状杆菌的活菌检测提供了一定的理论依据,也为由伪结核棒状杆菌诱发的山羊疫病防控奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张素辉		58	179	8.0	10.0
2	付利芝		87	268	9.0	12.0
3	龙小飞		13	5	1.0	1.0
4	李鹏飞		18	44	4.0	5.0
5	许国洋		28	39	4.0	5.0
6	陈朝洪		5	8	2.0	2.0