检测鸡TRIM25蛋白的免疫组化方法

• 作者: 李宏梅 胡卫国 褚颖 邱建华 郭慧君 陈茹 马文杰
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 TRIM25 多克隆抗体 免疫组化
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 865-870
• 页数: 6页
• 分类号: S852
• 字数: 4673字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.04.027

摘要

为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法,根据发表的鸡TRIM25基因序列,设计引物,从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因,构建重组原核表达质粒,通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白,经纯化后免疫接种兔和小鼠,获得高效价血清抗体,用该抗体建立免疫组化方法,对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测.结果显示,克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012 bp,构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌中稳定表达,经纯化后的重组蛋白质能够诱导兔和小鼠产生效价为1∶106以上的血清抗体,该血清抗体免疫组化检测发现鸡肺、脾和肝组织中均有不同程度的TRIM25蛋白表达,在肺组织中主要存在肺泡周围的内皮细胞、淋巴细胞等的细胞质内;脾组织主要出现在脾淋巴细胞和血管内皮细胞等的细胞质中;肝组织中主要出现在肝小叶肝细胞、淋巴细胞以及血管内皮细胞细胞质中.该研究为深入研究鸡TRIM25蛋白的组织分布、动态表达和生物学活性提供物质基础和方法依据.