尼罗罗非鱼TRIM16和TRIM25基因的克隆及表达分析

• 作者: 刘志刚 卢迈新 可小丽 曹建萌 王淼 郑建美 高风英
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 三重基序(TRIM)蛋白家族 基因克隆 无乳链球菌
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 861-873
• 页数: 13页
• 分类号: S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.06.001

摘要

泛素连接酶E3家族在脊椎动物的先天免疫中发挥重要作用,由于RING finger结构域的存在,三重基序(tripartite motif,TRIM)蛋白家族的很多成员被报道具有泛素连接酶活性.为了研究TRIM16和TRIM25基因在尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)免疫过程中的作用,本研究通过逆转录PCR和RACE获得了尼罗罗非鱼TRIM16和TRIM25基因的cDNA及基因组序列,并进行了基因结构和蛋白二级结构分析,qRT-PCR检测基因的组织分布、在胚胎发育过程中表达变化及其对无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染的响应.结果表明,TRIM16基因的cDNA(GenBank登录号:KY746714)全长2 314bp,ORF 1 677 bp,编码558个氨基酸;TRIM25基因的cDNA(GenBank登录号:KY968697)全长2 748bp,ORF1677bp,编码558个氨基酸,二者基因组序列均无内含子.氨基酸序列分析显示,TRIM 16和TRIM25均具有TRIM家族的RING finger结构域、B-box结构域等保守结构.组织分析表明,在所检测的11个组织和器官中,TRIM16和TRIM25基因均有表达,血液中表达最高,肝脏中表达最低,血液中的表达量分别为肝脏(对照组)的60.46和274.07倍.这两个基因在尼罗罗非鱼胚胎发育过程中均有表达.人工感染无乳链球菌后,TRIM16和TRIM25基因在所检测的5个组织和器官中的表达量均存在升高的阶段,TRIM16基因在肠、脾、鳃、肾脏和血液中的最高表达量分别为0h(对照组)的1.30、2.09、1.61、7.81和6.05倍,TRIM25基因在肠、脾、鳃、肾脏和血液中的最高表达量分别为对照组的11.13、1.22、1.26、61.41和77.80倍.上述结果表明,TRIM16和TRIM25基因在尼罗罗非鱼抗无乳链球菌感染的过程中发挥了重要作用.研究结果为进一步了解罗非鱼的抗感染免疫机制、探索病害防治新途径提供了理论基础.