EGFRvⅢ/CAR-T对EGFRvⅢ+U87胶质瘤细胞和裸鼠移植瘤的特异性杀伤作用

• 作者: 张炳勇 曹名波 李修岭 谢甲贝 郑岩 韩双印
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: EGFRvⅢ 嵌合抗原受体 胶质瘤 U87细胞 免疫治疗
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 专题报道:胶质瘤生物治疗的基础和临床研究
• 页码范围: 334-339
• 页数: 6页
• 分类号: R739.41|Q785|R730.51
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385x.2018.04.003

摘要

目的:制备靶向EGFRvⅢ的第三代CAR-T(EGFRvⅢ/3CAR-T),检测其在体外和体内对EGFRvI+ U87胶质瘤细胞的特异性杀伤效应.方法:用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染HEK293T细胞包装EGFRvⅢ/3CAR慢病毒(LV-EGFRvⅢ/3CAR),感染健康人CD3+T细胞,Western blotting和流式细胞术检测T细胞中EGFRvⅢ/3CAR的表达水平,51Cr释放法检测EGFRvⅢ/3CAR-T对EGFRvⅢ+ U87细胞的体外杀伤效应,ELISA法检测EGFRvⅢ/3CAR+T的IFN-γ分泌水平.构建裸鼠异种胶质瘤移植模型,检测EGFRvⅢ/3CAR-T对移植瘤的体内杀伤活性.结果:EGFRvⅢ/3CAR慢病毒包装成功,滴度值为5×106 TU/ml.Western blotting在相对分子质量58 000处检测到EGFRvⅢ/3CAR表达,未转导组无相同分子量蛋白表达.流式细胞术检测结果显示EGFRvⅢ/3CAR转导效率平均为52.3％,51Cr释放法检测EGFRvⅢ/3CAR-T特异性杀伤作用与E∶T值(E∶T为4∶1、为8∶1、16∶1、32∶1)呈正比关系.ELISA法检测到细胞因子IFN-γ分泌量为(1 836±148.2) pg/ml,与NTT和GFP+T细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01).EGFRvⅢ/3CAR+T细胞的特异性杀伤活性及IFN-γ分泌均依赖于EGFRvⅢ在U87细胞中的表达水平.体内肿瘤生长检测结果显示,注射后3周EGFRvⅢ/3CAR+T组肿瘤体积较GFP+T细胞和PBS组差异有统计学意义(P＜0.01).结论:EGFRvⅢ/3CAR-T在体外和体内均能发挥靶向杀伤EGFRvⅢ+脑胶质瘤细胞的作用,为后续临床试验提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩双印	郑州大学人民医院干细胞研究中心	41	92	6.0	7.0
2	郑岩	郑州大学人民医院干细胞研究中心	5	9	2.0	2.0
3	张炳勇	郑州大学人民医院干细胞研究中心	10	18	3.0	4.0
4	李修岭	郑州大学人民医院干细胞研究中心	23	58	5.0	6.0
5	曹名波	郑州大学人民医院干细胞研究中心	5	12	2.0	3.0
6	谢甲贝	郑州大学人民医院干细胞研究中心	4	19	3.0	4.0