EGFRvⅢ特异性单链抗体的制备及其靶向性能

• 作者: 周敏 孔娟 张庆丽 王海 石必枝 蒋华 谢海龙
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: EGFRvⅢ scFv 脑胶质瘤 肝癌 移植瘤 靶向治疗 活体成像
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 11-16
• 分类号: R392.1|R730.51|R739.41|R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2011.01.003

摘要

目的:应用噬菌体展示技术筛选出能与EGFRvⅢ特异性结合的单链抗体(single-chain Fv,scFv),并研究其靶向性能.方法:构建EGFRvⅢ特异性scFv噬菌体库,ELISA筛选阳性克隆,阳性EGFRvⅢ-scFv质粒重新克隆人pCANTAB-Throm-bin-His载体,转化E.coli HB2151,IPTG诱导可溶性EGFRvⅢ-scFv表达.间接免疫荧光及裸鼠活体成像技术鉴定EGFRv Ⅲ-scFv与EGFRvⅢ的特异性结合.结果:成功构建了EGFRvⅢ-scFv噬菌体库,ELISA筛选得到16个EGFRvⅢ-scFv克隆,取一克隆命名为EGFRvⅢ-scFv-2Al.EGFRvⅢ-scFv-2Al质粒重新克隆人pCANTAB-Thrombin-His载体,成功表达可溶性EGFRvⅢ-scFv-2Al.EGFRvⅢ-seFv-2Al在体外可特异性结合HuH7-EGFRvⅢ肝癌细胞,但不结合HuH7-EGFR和HuH7肝癌细胞;荧光标记的EGFRvⅢ-scFv-2Al裸鼠体内可特异性结合U87MG-EGFRvⅢ胶质瘤细胞移植瘤,而不结合U87MG细胞移植瘤.结论:成功制备的EGFRvⅢ-scFv-2Al可特异性靶向结合EGFRvⅢ,在肿瘤的诊断和靶向治疗中具有潜在应用价值.