猪圆环病毒2型Cap蛋白双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

• 作者: 丁国伟 叶正琴 姜晓芳 宋庆庆 李玉安 李琛 杨豫蒙 许兆君 魏荣荣
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 Cap蛋白 单抗,ELISA
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 73-77
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3897字
• 语种: 中文

摘要

为了建立起双抗体夹心ELISA定量测核衣壳蛋白(caspid protein,Cap)抗原方法,采用氯化铯密度梯度超速离心方法制备猪圆环病毒2型Cap蛋白标准品,制备出针对PCV2-Cap单克隆抗体及PCV2-Cap多克隆抗体,筛选最佳包被抗体和酶标抗体的稀释度,绘制标准曲线,验证方法,并应用该方法对不同转移载体构建的PCV2-Cap蛋白随时间变化的表达量进行测定.结果显示:最佳包被抗体和酶标抗体的稀释度均为1∶10 000,标准曲线的范围是15.6～250 ng/mL,线性相关系数≥0.99,准确性为(103.46±12.50)％,特异性良好;检测不同转移载体构建的Cap表达量随时间的变化,发现Cap含量接种后24h开始表达,72 h达到高峰,呈S形曲线增长模式.结果表明:已建立的双抗体夹心ELISA定量测Cap抗原方法灵敏度、精密性和准确性均符合研究要求.