小鼠miR-487b-3p对C2C12增殖和分化调控作用的研究

• 作者: 凌笑笑 吴晓云 唐朋 梁春年 褚敏 贾聪俊 阎萍
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小鼠 miR-487b-3p 增殖 分化 PITX2
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 2371-2383
• 页数: 13页
• 分类号: S811.2
• 字数: 7047字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.11.008

摘要

旨在研究miR-487b-3p对小鼠C2C12细胞增殖与分化的具体调控机制.本研究以小鼠成肌细胞系(C2C12)为研究对象,利用qRT-PCR检测miR-487h-3p在小鼠各组织和C2C12细胞增殖与分化过程中的表达情况;通过转染miR-487b-3p mimics和miR-487b-3p inhibitor后,利用qRT-PCR检测转染效率,并采用qRT-PCR和Western blotting检测增殖标记基因PCNA和分化标记基因MYOD、MYOG和MYHC的表达差异;利用生物信息学软件对miR-487b-3p靶基因进行预测,利用qRT-PCR检测小鼠C2C12细胞增殖与分化过程中PITX2的表达情况,并检测过表达(抑制)miR-487b-3p后PITX2的表达差异,通过双荧光素酶报告系统验证miR-487b-3p和PITX2的靶标关系.结果表明,miR-487b-3p在小鼠骨骼肌中相对表达最高,在C2C12细胞增殖与分化的过程中miR-487b-3p的表达量整体上呈现上升趋势,推测miR-487b-3p参与调控骨骼肌发育.过表达miR-487b-3p后,极显著上调miR-487b-3p的表达(P＜0.01),在转录和蛋白水平均极显著上调PCNA的表达(P＜0.01),显著下调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达(P＜0.05),同时显著下调MYHC(P＜0.05)、MYOD(P＜0.01)和MYOG蛋白(P＜0.05)的表达;而抑制miR-487b-3p后,极显著下调miR-487b-3p的表达(P＜0.01),显著下调PCNA基因的表达(P＜0.05),极显著下调PCNA蛋白的表达(P＜0.01),显著上调MYHC、MYOD和MYOG蛋白的表达(P＜0.05),上调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达,但未达显著水平(P＞0.05).在C2C12细胞增殖和分化过程中,PITX2与miR-487b-3p表达趋势相反;过表达miR-487b-3p能极显著下调PITX2 mRNA的表达(P＜0.01),相反,抑制miR-487b-3p的表达则极显著上调PITX2 mRNA的表达(P＜0.01);双荧光素酶报告系统验证PITX2是miR-487b-3p的直接靶基因.综上表明,miR-487b-3p通过靶向PITX2促进C2C12细胞增殖而抑制其分化.