水疱性口炎病毒免提取核酸荧光定量PCR鉴别检测方法的建立

• 作者: 吕建强 张彩虹 曹琛福 杨俊兴 林庆燕 林彦星 祁振强 花群义 黄超华
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 水疱性口炎病毒 直扩荧光定量PCR 鉴别检测
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 25-29
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.11.005

摘要

为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记.经过对各反应条件的优化,建立了直接从样品中鉴别VSV-IND和VSV-NJ的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行分析.结果显示,该直扩荧光定量PCR能准确鉴别VSV-IND和VSV-NJ,两者没有交叉反应现象,对其他几种相似病原的灭活抗原,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪水疱病病毒(SVDV)、蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等,检测均呈阴性.对10倍系列稀释的水疱性口炎灭活病毒液的检测敏感性可达10-5,与传统的荧光定量PC R的检测敏感性相当.该方法无需提取核酸,可在2 h内完成对样品的检测,结果准确、快速、灵敏,为印第安纳型和新泽西型水疱性口炎病毒的特异性鉴别提供了一种切实可行的方法.