热带念珠菌β-葡聚糖合成酶KRE9基因原核表达及其比活力测定

• 作者: 刘政伟 张瑞玲 李瑞芳
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: β-葡聚糖合成酶(KRE9) 热带念珠菌 原核表达 纯化 比活力
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 628-634
• 页数: 7页
• 分类号: S154.39
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2018.04.02

摘要

[目的]原核表达热带念珠菌(Candida tropicalis MYA-3404)β-葡聚糖合成酶(KRE9),并进行酶比活力测定,为研究其结构和生物学功能提供参考.[方法]提取热带念珠菌DNA,PCR扩增KRE9基因,构建其原核表达载体pET28a-KRE9后转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达及组氨酸(His)标签纯化树脂亲和柱纯化获得融合蛋白KRE9,并利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法测定其比活力.[结果]克隆获得的KRE9基因全长816 bp,编码271个氨基酸,与参考基因序列(GenBank登录号XM_002547984)的相似性高达99.75%.将其原核表达载体pET28a-KRE9转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过诱导表达及纯化获得重组蛋白KRE9,经SDS-PAGE检测,发现其纯度较高,大小约35 kD.Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白KRE9能与抗His抗体发生特异性结合.重组蛋白KRE9比活力为9.169×104U/mg.[结论]重组蛋白KRE9具有良好的特异性和较高β-葡聚糖合成酶活性,可用于其结构和生物学功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李瑞芳	河南工业大学生物工程学院	47	337	8.0	16.0
2	刘政伟	河南工业大学生物工程学院	2	4	1.0	2.0
3	张瑞玲	河南工业大学生物工程学院	2	4	1.0	2.0