应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究

• 作者: 东野升金 刘艳艳 张全芳 步迅 胡悦 范阳阳 谭晴晴
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 动物毛纤维 多重实时荧光PCR 鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1540-1549
• 页数: 10页
• 分类号: Q341
• 字数: 7381字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.07.025

摘要

本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究.利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针;通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件,建立了多重实时荧光PCR检测体系;并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估.结果表明,使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法,并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳,满足实时荧光PCR检测要求.本方法DNA灵敏度为0.01 ng,混合样本方法检出限为1.0％.因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA,建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势.本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定,为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础.