东方肉座菌EU7-22纤维素内切酶Ⅰ的异源表达

• 作者: 林俊涵 林谢榕 柯伙钊 柯轶 王娜 魏瑜 龙敏南
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 东方肉座菌 纤维素内切酶 毕赤酵母 PHO1信号肽 糖基化
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6,38
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0001

摘要

[目的]实现东方肉座菌纤维素内切酶EGⅠ在毕赤酵母中的表达,获得重组EGⅠ.[方法]通过RT-PCR获得EGⅠ开放阅读框.将EGⅠ成熟肽和PHO1信号肽的DNA片段插入pPIC3.5K后,重组表达载体电转化毕赤酵母.通过甲醇诱导表达和镍柱纯化获得EGⅠ.以羟甲基纤维素钠检测活性,以肽N-糖苷酶F分析N-糖基化,以SDS-PAGE分析表达情况和糖基化修饰.[结果]获得EGⅠ分泌表达菌株,诱导96 h后上清液活性为0.513±0.002 U/mL,纯化后的EGⅠ活性为0.558 ±0.012 U/mg.SDS-PAGE表明EGⅠ分子量在100～180 kDa,远高于预测值47.3kDa,经肽N-糖苷酶F处理后,降至63～ 75 kDa.[结论]实现了EGⅠ的分泌表达,获得活性为0.558±0.012 U/mg的糖基化重组EGⅠ.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柯伙钊		19	89	7.0	8.0
2	柯轶		8	7	2.0	2.0
3	林俊涵		11	67	3.0	8.0
4	王娜		4	2	1.0	1.0
5	林谢榕		1	0	0.0	0.0
6	魏瑜		3	1	1.0	1.0
7	龙敏南		3	4	1.0	2.0