家蚕bmo-miR-0031-3p体内下调丝素轻链基因BmFib-L的表达

• 作者: 唐顺明 沈兴家 王雪珍 蒋涛 钱平 陈艳花
• 来源期刊: 浙江大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 微RNA 家蚕 bmo-miR-0031-3p 丝素轻链基因 转录后调控
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学与动物医学
• 页码范围: 229-236
• 页数: 8页
• 分类号: S881.2
• 字数: 6126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2018.11.261

摘要

为了研究家蚕微RNA(microRNA,miRNA)对丝素轻链基因BmFib-L表达的调控作用,以BmFib-L mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)为靶标,通过RNAhybrid软件分析,筛选出种子序列与BmFib-L 3′UTR完全互补的家蚕miRNA——bmo-miR-0031-3p(简称"miR-0031-3p").分别构建miR-0031-3p表达载体pcDNA3.0[ie1-egfp-pre-miR-0031-3p-SV40]和BmFib-L 3′UTR融合萤光素酶报告基因重组表达质粒pGL3.0[A3-luc-Fib-L-3′UTR-SV40],以海肾萤光素酶表达载体pRL-CMV为内参,共转染BmN细胞,通过检测双萤光素酶活性验证miR-0031-3p的功能;人工合成miR-0031-3p的模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor),再进一步验证miR-0031-3p对BmFib-L的调控功能.结果显示,在BmN细胞中,miR-0031-3p显著抑制BmFib-L的表达.为了进一步验证miR-0031-3p在家蚕体内对BmFib-L表达的调控作用,在5龄第2天幼虫体腔内注射转染物,分别在体内过表达和抑制内源性miR-0031-3p,荧光定量分析靶基因表达水平.结果显示,miR-0031-3p在幼虫体内能够下调BmFib-L的表达.该研究结果有利于阐明家蚕miRNA功能和蚕丝蛋白表达调控的分子机制.