牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿AP1-AP2-BP基因亚单位抗体的制备

• 作者: 吴金花 布日额 王金良 王雪吟 锡林高娃 陈金龙
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 无乳链球菌 AP1-AP2-BP 蛋白纯化 亚单位抗体
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 206-211
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1
• 字数: 4055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.011

摘要

目的 构建牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿PI-2a亚单位重组抗原AP1-AP2-BP,并制备其多亚单位抗体,为后期研制新型免疫疫苗和检测试剂提供实验基础.方法 利用延伸PCR技术构建了AP1-AP2-BP三联基因,并将该串联基因进行转化,诱导,表达,纯化,并将纯化蛋白制作为抗原,对家兔免疫,制备多亚单位抗体,并通过亲和层析的方式从免疫后的血清中获得纯化的IgG,完成多亚单位抗体的制备.结果 AP1-AP2-BP三基因串联重组工程菌株通过诱导、表达,对产物亲和层析等方法获得的纯化蛋白,其相对分子质量为65 kDa,其含量达到3.3 mg/mL,并具有较好的免疫原性.经间接ELISA可知,经过4周的免疫抗体的滴度已达到1∶5 600的水平.通过Protein A280测量数据表明,纯化后的IgG的含量高达9.1mg/mL.结论 牛乳腺炎无乳链球菌的菌毛岛屿AP1-AP2-BP三基因串联重组工程菌经诱导、表达后获得的纯化蛋白APt-AP2-BP多亚单位抗原有较好的免疫原性,为制备相应多亚单位抗体的制备提供了良好的多价抗原,同时为将研制新型工程疫苗及检测试剂提供了科学研究基础.