牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用

• 作者: 关平原 李新培 温永俊 王昊 范峻豪 赵洪哲
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 杂交瘤细胞 单克隆抗体(MAb) 直标荧光抗体
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 287-293
• 页数: 7页
• 分类号: S852.653
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0018

摘要

为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠.间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合.用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行2次亚克隆后注射入小鼠腹腔制备单抗腹水.利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,用间接免疫荧光试验测定其活性,用SDS-PAGE试验测定其纯度.经活性、纯度检测合格后,采用搅拌法与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联;用葡聚糖G-25 Medium介质进行分离纯化.结果,本研究共获得2株能够稳定分泌IgG1类型的阳性杂交瘤细胞株和一种直接荧光抗体,分别被命名为BMAb11、BMAb20、DB11.稳定性试验表明,杂交瘤细胞分泌的抗体稳定性好.ELISA、间接免疫荧光试验和直接免疫荧光试验表明,单克隆抗体和直标荧光抗体均与BVDV发生特异性反应,说明它们的特异性较好.经ELISA鉴定,腹水抗体效价达到1∶12 800.直接荧光抗体荧光素与蛋白的摩尔比(F/P)为3.34,标准值在2.0～4.0之间,符合标准.上述研究结果表明,本研究制备的单克隆抗体和直标荧光抗体可用于BVDV的检测,为BVDV的临床诊断奠定了基础.