山葡萄类黄酮-5-O-葡萄糖基转移酶基因(5GT)的克隆表达及遗传转化分析

• 作者: 刘海峰 陈蒙
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山葡萄 克隆 类黄酮-5-O-葡萄糖基转移酶 原核表达 遗传转化
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 页码范围: 73-81
• 页数: 9页
• 分类号: S663.1
• 字数: 6459字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11841/j.issn.1007-4333.2019.05.09

摘要

为探究5GT基因在山葡萄花色苷合成过程中的表达规律及作用,以山葡萄(Vitis amurensis)为材料,利用RT-PCR技术克隆山葡萄5GT基因的全长cDNA序列(GenBank登录号为GU237133),将该基因命名为Vam5GT并对该蛋白进行生物信息学分析预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测Vam5GT基因在山葡萄8个不同转色时期的表达规律,将克隆获得的Vam5GT基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli B12(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.并构建表达载体pC5GT并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化.结果 显示:克隆获得的Vam5GT cDNA全长1 497 bp,开放阅读框1 347 bp,编码448个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为49.84 ku,等电点为5.23,是不稳定蛋白.该基因属于UDPGT超基因家族,不包含信号肽.Vam5GT在山葡萄花后4周的果皮中表达丰度最高,其他时期表达逐渐下降;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,在含50 mg/L Kanomycin的培养基上对拟南芥To代种子进行筛选,先后得到2个阳性幼苗,转化率为0.05％.对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘海峰	延边大学农学院	34	114	5.0	9.0
2	陈蒙	延边大学农学院	9	10	2.0	3.0