分离与鉴定人脂肪间充质干细胞来源的外泌体

• 作者: 华骋 徐全臣 李坤 王志国 王静 蔡霞
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 脂肪间充质干细胞 外泌体 成脂诱导 成骨诱导 细胞鉴定 免疫磁珠法 流式细胞学检测
• 年，卷（期）: 2019,（17）
• 所属期刊栏目: 脂肪干细胞
• 页码范围: 2651-2658
• 页数: 8页
• 分类号: R459.9|R364
• 字数: 7721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1715

摘要

背景:脂肪间充质干细胞是重要的种子细胞之一,可通过较简单的方法大量提取,但其储存条件较苛刻,运输不便,临床应用较困难.外泌体可由脂肪间充质干细胞分泌,其结构稳定,不易分解,为脂肪间充质干细胞在临床应用提供了新的可能性.目的:提取人脂肪间充质干细胞,鉴定脂肪间充质干细胞,诱导脂肪间充质干细胞多向分化,提取脂肪间充质干细胞来源的外泌体,鉴定脂肪间充质干细胞来源的外泌体.方法:收集青岛大学附属医院医学美容中心的正常成年女性行吸脂术后腹部浅层皮下脂肪组织,用酶消化法分离提取脂肪间充质干细胞进行原代培养,用细胞贴壁法纯化,胰酶消化传代.选取第3代细胞分别行流式细胞学鉴定,成脂肪细胞诱导与鉴定;成骨细胞诱导与鉴定.取第3-6代脂肪间充质干细胞,收集细胞上清液,差速离心法提取外泌体,BCA法测定蛋白浓度,透射电镜观察外泌体形态,粒度仪测外泌体直径分布,免疫磁珠法和流式细胞学鉴定.结果与结论:①脂肪间充质干细胞形态为长梭形,形似成纤维细胞,排列紧密时呈巢状;②流式细胞学检测显示CD29,CD44,CD90及CD105均为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达;③成骨细胞诱导至第9天碱性磷酸酶染色为蓝紫色,诱导至21 d时,茜素红S染色可见细胞外基质内出现红色钙结节;④成脂肪细胞诱导14 d后油红O染色呈橘红色;⑤透射电镜显示外泌体结构为杯状,直径为(81.225±22.226)nm,有膜结构.蛋白浓度约为1.5 g/L,直径分布集中于70-100 nm,外泌体流式细胞学显示CD9,CD29,CD44,CD63,CD90和CD105为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达;⑥结果证实,人脂肪间充质干细胞来源的外泌体能通过超速离心法顺利提取,并通过透射电子显微镜、免疫磁珠法和流式细胞学检测相结合的方法成功鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王静	青岛大学医学部	203	602	11.0	17.0
2	王志国	青岛大学附属医院烧伤整形外科	23	67	5.0	6.0
3	徐全臣	青岛大学附属医院口腔科	33	112	7.0	8.0
4	蔡霞	青岛大学附属医院烧伤整形外科	12	22	2.0	3.0
5	李坤	青岛市第八人民医院手足外科	1	2	1.0	1.0
6	华骋		1	2	1.0	1.0