摘要:
目的 建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测血清油酸(OA),初步评估OA在2型糖尿病(T2DM)胰岛素抵抗(IR)中的作用.方法 用OA-[13C5]作为同位素内标物,OA和OA-[13C5]的离子对分别为281.3/281.3和286.3/286.3.ZORBAX SB-Aq C18反相色谱柱,流动相A为超纯水,流动相B为甲醇乙腈(1∶1,v/v),梯度洗脱,流速0.3 mL/min.根据EP15-A3文件,考察精密度和正确度、线性范围、稳定性、携带污染率等性能以评价该方法的可靠性.选取临床确诊T2DM患者109例及体检健康者100例,用HPLC-MS/MS检测血清OA,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价IR,进一步分析OA与IR的关系.结果 建立的检测OA的HPLC-MS/MS特异性好,在10~1 000 μmol/L范围内线性关系良好,y=0.007 55x+0.004 83,r=0.997 7,定量限(LLOQ)为10 μmol/L,批内不精密度(以变异系数CV表示)≤1.62%,实验室内CV≤1.73%,方法精密度较好,适合临床血清样品的测定.与健康人对照组血清OA水平(113.20±58.00) μmol/L比较,T2DM组血清OA水平(425.58±220.17) μmol/L升高,且对照组和T2DM组OA与HOMA-IR均呈正相关.以OA诊断IR的AUC为0.689,当根据约登指数确定cut-off值为235.8 μmol/L时,敏感性为70.4%,特异性为63%;当OA联合FPG诊断IR时,AUC增至0.806,且与OA诊断IR的AUC比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 建立了科学、高效定量检测血清OA浓度水平的HPLC-MS/MS,为动态监测代谢性疾病人群OA含量的变化提供了可靠的方法.