乙脑/登革4型嵌合病毒的构建及其小鼠神经毒力测定

• 作者: 刘杰 刘莉娜 孙艳 曾献武 杨会强 汪伟 范凤鸣
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 登革疫苗 乙脑/登革嵌合病毒 神经毒力 安全性
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-13
• 页数: 6页
• 分类号: R378
• 字数: 4197字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2019.01.002

摘要

目的 构建以乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)疫苗株SA14-14-2为基因骨架的乙脑/登革4型嵌合病毒,并分析该嵌合病毒对小鼠的神经毒力.方法 通过重叠PCR方法扩增含有登革病毒4型(DENV-4)H241株prME基因序列和乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的NS1蛋白前177个核苷酸的融合片段,用NarⅠ和BglⅡ双酶切后替换乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2全长克隆中的相应区域,构建成乙脑/登革4型嵌合全长克隆,通过体外转录和转染BHK21细胞获得嵌合病毒(JEV/DENV-4 chimeric virus,JD4).通过测定嵌合病毒JD4和2个母本株JEV SA14-14-2株及DENV-4 H241株蚀斑大小、小鼠脑内神经毒力和皮下感染入脑能力、乳鼠脑内神经毒力,比较JD4和母本株之间的差异.通过将JD4在原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞传代30次,分析传代后嵌合病毒的神经毒力是否减弱及减弱的程度.结果 测序结果表明,构建的嵌合病毒JD4基因组序列和预期一致,没有产生新的位点突变.JD4蚀斑较SA14-14-2明显偏小,但和DENV-4 H241株没有明显区别.JD4对3周龄小鼠具有较强的脑内神经毒力,和母本株DENV-4 H241没有差异,对小鼠没有神经侵袭力.乳鼠实验结果表明,嵌合病毒JD4脑内神经毒力虽然略低于母本株DENV-4 H241,但两者之间没有明显差异,都明显强于乙脑疫苗株SA14-14-2.在PHK细胞传代30次后,小鼠神经毒力虽然有所减低,但并不明显.结论 成功构建了嵌合病毒JD4,通过测定并比较JD4与母本株的蚀斑特征、小鼠及乳鼠神经毒力等试验,为分析登革疫苗候选株安全性研究奠定了基础.