短发夹RNA TRPV4基因对脊柱侧弯大鼠模型椎间盘退变的抑制作用

• 作者: 孔建军 李琰 祝聪聪 陈子奇
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 髓核细胞 脊柱侧弯 凋亡 机械敏感性离子通道 瞬时感受器电位香草素4(TRPV4)
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 356-363
• 页数: 8页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4302字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2019.05.004

摘要

目的 探究短发夹RNA(shRNA)瞬时感受器电位香草素4(transient receptor potential vanilloid,TRPV4)基因对抑制SD大鼠脊柱侧弯动物模型椎间盘退变的机制.方法 采用经典的双足大鼠脊柱侧弯模型构建动物模型,根据小干扰RNA(siRNA)干扰原理,构建短发夹RNA(shRNA)-TRPV4干扰载体,根据实验目的大鼠分为对照组、模型组和shRNA组.采用影像学摄片观察大鼠脊柱侧弯的程度和cobb角度;HE染色观察退变椎间盘组织;免疫组织化学染色检测髓核组织中Ⅱ型胶原和多聚蛋白多糖(Aggrecan)的表达;实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blotting从基因和蛋白两个层面检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS);炎症相关因子环氧合酶2(COX-2)和金属蛋白酶9(MMP-9);以及凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),Bcl-2家族抗凋亡因子(Bad),Bcl-2家族相关X蛋白(Bax)以及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3),Caspase-6和Caspase-9的表达水平.结果 0.011 μL shRNA-TRPV4慢病毒量转染效率较高,为90.3％;对照组SD大鼠未发生侧弯;模型组SD大鼠脊柱向左侧弯,cobb角为35.22°±2.18°;shRNA组SD大鼠脊柱向左侧弯,cobb角为24.07°±3.09°;RT-PCR结果显示,模型组髓核组织中iNOS,COX-2,MMP-9,Bad,Bax和凋亡相关因子Caspase-3,Caspase-6,Caspase-9的mRNA表达水平均高于对照组(P＜0.05);而抗凋亡因子Bcl-2的表达水平要低于对照组(P＜0.05);Western blotting结果显示,模型组髓核组织中iNOS和MMP-9的蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05);而低于shRNA组(P＜0.05);免疫组织化学染色结果显示,shRNA组髓核组织中Ⅱ型胶原蛋白和多聚蛋白多糖(Aggrecan)蛋白的蛋白表达水平均低于对照组(P＜0.05);而高于模型组(P＜0.05).结论 shRNA-TRPV4可以抑制脊柱侧弯鼠模型中髓核细胞的凋亡,降低髓核组织中iNOS以及炎性因子COX-2和MMP-9的表达,对髓核组织的退变起到保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔建军	冀中能源邢台矿业集团总医院骨科	17	48	3.0	6.0
2	李琰	冀中能源邢台矿业集团总医院骨科	2	4	1.0	2.0
3	陈子奇	冀中能源邢台矿业集团总医院骨科	1	1	1.0	1.0
4	祝聪聪	邢台医学高等专科学校第二附属医院内科	1	1	1.0	1.0