SDSL-EPR技术检测LC3B蛋白功能结构域中特定位点的运动特性

• 作者: 吴可 董国福 赵曦 郭俊旺 马蕾
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: SDSL-EPR 自噬相关蛋白质类 LC3B 旋转相关时间 运动性
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 664-668
• 页数: 5页
• 分类号: R445.2|Q51
• 字数: 3854字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2019.09.007

摘要

目的 用定点自旋标记-电子顺磁共振(SDSL-EPR)技术检测自噬相关蛋白LC3B功能结构域上特定氨基酸位点的运动特性.方法 采用序列重叠延伸PCR(SOE-PCR)法对LC3B蛋白NHD结构域α1螺旋Q9位点、ULD结构域α3螺旋N59位点以及口袋结构内部β1折叠I35位点引入半胱氨酸(cysteamine,Cys)突变,表达纯化获得LC3B突变体蛋白;甲烷硫代磺酸(2,2,5,5-tetramethyl-1-oxyl-3-methyl methanethiosulfonate,MTSL)自旋标记后进行电子顺磁共振(EPR)检测,通过计算EPR波谱旋转相关时间τc,分析不同氨基酸位点的运动特性.结果 构建了LC3B突变体基因的原核表达载体pET-22b-LC3B,实现了蛋白的可溶性高效表达;Q9C和N59C位点EPR波谱呈现双成分叠加谱,Q9C位点不同运动成分的τc值分别为1和3.8 ns,N59C位点为1和3.4 ns;I35C位点为三成分叠加谱,其τc值分别为0.7、2.9和8.1 ns.结论 存在于特定氨基酸位点的运动性差别,预示着溶液状态下LC3B蛋白各功能结构域的同一氨基酸位点处可能存在不同的构象特征.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴可	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所	3	2	1.0	1.0
2	董国福	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所	3	0	0.0	0.0
3	赵曦	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所	2	0	0.0	0.0
4	马蕾	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所	1	0	0.0	0.0
5	郭俊旺	军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所	1	0	0.0	0.0