基于TaqMan qPCR检测凡纳滨对虾样品中虾肝肠胞虫并样检测方法的评价

• 作者: 于党辉 宋增磊 武和英 王秀华 董宣 谢国驷 赵若恒 黄捷
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 凡纳滨对虾 虾肝肠胞虫(EHP) qPCR 并样检测
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 122-132
• 页数: 11页
• 分类号: S945.4
• 字数: 7602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180421002

摘要

对山东海阳和潍坊的2个养殖凡纳滨对虾群体取样,采用TaqMan qPCR逐尾检测肝胰腺中的虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)载量,再将提取的DNA样品按5并1(5∶1)、25并1(25∶1)、50并1(50∶1)、100并1(100∶1)和150并1(150∶1)进行并样,检测并样的EHP载量.设定不同临界循环数为假定灵敏度,定性判断各单尾检测阳性及并样组阳性,比较不同并样模式与检测阳性率、诊断灵敏度、诊断特异性等之间的关系以及定量的准确性.结果 表明,检测灵敏度过低,会降低高并样率检测的准确性;阳性率在30％以上时,高并样率的检测结果与单样品检测相符性很好;高载量感染的阳性率不低于6.7％时,50∶1以内的并样能准确得出检测结果;低载量感染的阳性率不低于16％时,25∶1以内的并样能得出较好结果;高载量感染的1.3％阳性率和低载量感染的8％阳性率可能导致所有并样出现假阴性结果;各种并样模式均有很好的诊断特异性,50∶1并样的诊断灵敏度与OIE标准推荐的5∶1并样的接近;各并样检测的EHP载量与单样品检测平均值之比在0.27～2.83范围,二者存在极显著相关性,各种并样模式的定量检测结果在数量级水平能大致反映样品的平均EHP载量.本研究为水生动物疫病诊断和流行病学调查的样品检测提供了参考依据.