基于GEM展示技术内含肽介导的犬α干扰素快速纯化系统的建立

• 作者: 乔绪稳 仝晴晴 侯继波 张元鹏 杨利 牛家强 郑其升 陈瑾
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 断裂型内含肽 GEM C末端剪切 纯化
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 9-15
• 页数: 7页
• 分类号: S852.42
• 字数: 3844字
• 语种: 中文

摘要

本研究分别构建含有断裂型内含肽(inteins)C端与犬α干扰素融合基因(C*-CaIFN-α)、断裂型内含肽N端与锚钩蛋白(protein anchor,PA)融合基因(NC1A-PA3)的重组表达质粒,利用IPTG诱导表达.通过GEM颗粒(gam-positive baterial enhancer matrix particles)与PA3之间的特异性结合,将NC1A-PA3蛋白捕获到GEM颗粒上,再利用内含肽的N端与C端的结合,获得GEM-PA3-NC1A-C*-CaIFN-α.在DTT或EDTA存在情况下,内含肽C末端自我剪切,获得纯化的犬α干扰素重组蛋白CaIFN-α.通过微量细胞病变抑制方法测定CaIFN-α蛋白的活性.结果表明,两种重组蛋白均有可溶形式表达,GEM/inteins纯化系统效果良好;纯化的犬α干扰素CaIFN-α对水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的抗病毒活性为3.0×106 U/mL.本研究建立的基于GEM展示平台的蛋白纯化系统,将非层析标签与断裂内含肽系统相结合,为快速有效地纯化重组蛋白提供了一种方法.