桦褐孔菌膜二肽酶在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

• 作者: 王艳 胡萍 袁雯雯 赵艳霞 郑维发 黄金金
• 来源期刊: 菌物学报
• 关键词: 桦褐孔菌 二肽酶 巴斯德毕赤酵母表达体系 异源表达
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 686-697
• 页数: 12页
• 字数: 8390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13346/j.mycosystema.190008

摘要

本研究利用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris蛋白表达体系表达了药用担子菌桦褐孔菌的一个二肽酶基因.该二肽酶基因编码区全长1 814bp,包含6个内含子,编码465个氨基酸.生物信息学分析发现,二肽酶基因编码的蛋白中不含信号肽序列,但在第55-77位氨基酸之间存在一个跨膜结构.将含跨膜结构和去跨膜结构蛋白的cDNA序列分别克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA上,电转化至巴斯德毕赤酵母X-33中,用1％(v/v)甲醇诱导重组菌株表达目标蛋白,采用SDS-PAGE和Western-blot检测表达蛋白.结果 显示,巴斯德毕赤酵母可表达含跨膜结构的完整基因,但目标蛋白不能分泌到胞外,存在于破碎细胞的沉淀中,且没有催化活性;而去跨膜结构的蛋白则可分泌表达到胞外,并具有催化活性.Ni-NTA纯化去跨膜结构的桦褐孔菌二肽酶浓度可达0.12mg/mL,并发现其在pH 7.3、反应温度50℃、反应时间2h的条件下,以Gly-Gly为底物时,其比活为433U/mg.同时检测到其对Ile-Leu、Trp-Trp和Phe-Phe具有较高的水解活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵艳霞	江苏师范大学药用植物生物技术实验室	8	14	2.0	3.0
2	袁雯雯	江苏师范大学药用植物生物技术实验室	2	0	0.0	0.0
3	郑维发	江苏师范大学药用植物生物技术实验室	7	23	3.0	4.0
4	王艳	江苏师范大学药用植物生物技术实验室	4	0	0.0	0.0
5	胡萍	江苏师范大学药用植物生物技术实验室	2	0	0.0	0.0
6	黄金金	江苏师范大学药用植物生物技术实验室	2	0	0.0	0.0