CRISPR/Cas9介导烟草多基因编辑体系的应用

• 作者: 张剑锋 李泽锋 杨军 武明珠 王晨 罗朝鹏 翟妞 谢小东 高军平 魏攀
• 来源期刊: 中国烟草学报
• 关键词: 烟草 CRISPR/Cas9 多基因 突变
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 72-80
• 页数: 9页
• 字数: 6703字
• 语种: 中文

摘要

CRISPR/Cas9是一种新型的基因组定向编辑技术,近年来在烟草基因组的定向编辑中得到了广泛应用.CRISPR/Cas9介导的多基因编辑技术在许多物种中表现出很大的潜力,为了探索CRISPR/Cas9介导烟草多基因编辑的技术体系,本文针对烟草PCS1、HMA2、eIF4E、TOM3、TOM15个不同性状相关的基因构建了多靶点敲除的CRISPR/Cas9系统,并借助农杆菌介导的遗传转化技术转化烟草品种K326.对阳性植株的筛选、靶位点基因组的PCR扩增与测序分析表明,构建的CRISPR/Cas9多基因编辑系统成功转化到烟草中,能够同时靶向突变5个基因.5个基因同时突变的检出率为53.8％,单基因的突变检出率在76.9％ 与92.3％ 之间.进一步的脱靶检测分析显示,在所预测脱靶的候选位点上均未发生脱靶现象.本文构建的CRISPR/Cas9多基因编辑系统可将多个基因进行有效突变,为烟草基因功能研究和基于CRISPR/Cas9技术的多性状改良奠定了基础.