改良P CR-RFLP法检测MTHFR基因C677 T位点多态性

• 作者: 何震宇 游娟 顾取良
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因 单核苷酸多态性 基因分型 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 669-673
• 页数: 5页
• 分类号: R392.21
• 字数: 2470字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2019060701

摘要

目的 建立一种简便、实用、准确的检测5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T位点多态性的方法 .方法在分析MTHFR基因C677T多态位点相关序列的基础上,设计1对特异性引物,通过聚合酶链反应扩增1个535 bp的靶片段,该靶片段跨越MTHFR基因C677T多态位点,且在多态位点上游163 bp处含有一个限制性核酸内切酶HinfI识别位点,该识别位点可作为后续HinfI酶切分型的内对照,PCR产物用HinfI快速消化,再用琼脂糖凝胶电泳分离消化产物,得出相应的限制性酶切图谱用于判别基因型.结果 可从限制性酶切图谱中明确判断各样品MTHFR基因C677T位点基因型,CC、CT、TT 3种基因型样品的分型结果与基因测序完全吻合.采用本法检测了100例样品,检得MTHFR C677T 3种基因型样品即CC、CT、TT的频率分别为0.59、0.35、0.06;C和T等位基因频率分别为0.765和0.235,符合Hardy-Weinberg遗传平衡(χ2=0.0723,P=0.965>0.05).结论 该方法由于PCR产物中含有HinfI酶切内对照序列,能克服传统PCR-RFLP法酶切不完全可能导致基因型误判的缺点,简便、实用、准确,适合一般实验室应用及流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾取良	广东药科大学生物化学与分子生物学系	9	17	3.0	3.0
2	何震宇	广东药科大学生物化学与分子生物学系	3	1	1.0	1.0
3	游娟	广东药科大学生物化学与分子生物学系	1	1	1.0	1.0