人脐带来源Muse细胞培养、筛选、鉴定及其移植治疗大鼠脊髓损伤

• 作者: 冷子宽 孙丽君 翟静静 许建中 贺西京 赵英杰 高正超
• 来源期刊: 中国骨伤
• 学科: 医学
• 关键词: 脐带 细胞培养技术 细胞移植 脊髓损伤
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 327-334
• 页数: 8页
• 分类号: R681.5
• 字数: 5662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0034.2019.04.007

摘要

目的:应用免疫磁珠筛选方法从人脐带华通胶间充质基质细胞中特异性地分选多系分化持续应激细胞(multilineage-differentiatingstress-enduring,Muse),并探讨Muse细胞移植治疗大鼠亚急性脊髓损伤的安全性和有效性.方法:将捐赠的脐带华通胶剥离剪碎、胶原酶/胰酶消化、密度梯度离心获得足量间充质基质细胞,应用免疫磁珠特异性筛选SSEA3+的Muse细胞,并使用流式细胞仪及细胞免疫组织化学方法鉴定.体内实验:使用NYU-Ⅲ代大鼠脊髓损伤打击仪建立垂直打击脊髓损伤模型,分为A组(假手术组)、B组(对照组)、C组(Non-Muse细胞移植组)和D组(Muse细胞移植组).A组大鼠接受标准化的椎板切除手术,但不进行脊髓打击;B、C、D组大鼠均接受标准化的脊髓打击损伤,10g撞击杆于12.5 mm高度自由落下.脊髓损伤造模后2周进行细胞移植,A组大鼠仅打开伤口不接受移植操作,B、C、D组大鼠分别接受PBS注射、Non-Muse细胞移植、Muse细胞移植,每只大鼠脊髓接受四点注射法,共 4×105个细胞.自脊髓损伤造模术后1 d及1、2、3、4、5、6周分别进行大鼠BBB运动功能评分,造模术后6周(即细胞移植后4周)处死动物,用免疫荧光染色研究大鼠脊髓内移植细胞存活、迁移和分化情况.结果:流式细胞仪显示脐带间充质基质细胞CD105+、CD90+和CD73+的百分比均达到99.5％以上,且CD45、CD14表达均低于0.5％,而SSEA3阳性率仅有1.46％.MACS特异性筛选后的细胞群有92.0％同时表达SSEA3和CD105,且免疫组织化学显示SSEA3呈典型的膜染色、形态特别.动物实验:A组动物在各个时间点的BBB评分均为21.单因素方差分析及LSD检验BBB评分情况:细胞移植后6周,C、D组与B组比较差异均有统计学意义(P=0.004,0.002),C组和D组比较差异无统计学意义.进一步组内配对t检验表明,C组第4周与第3周比较差异有统计学意义(P=.005);D组第4周与第3周比较差异有统计学意义(P=0.016),且第6周与第5周比较差异有统计学意义(Pb0.034),说明大鼠运动功能持续改善.脊髓免疫组织化学染色显示,Muse细胞和Non-Muse细胞均由注射点向损伤区迁移,但Muse细胞存活数量明显多于 Non-Muse细胞,且在损伤区均匀分布.结论:特异性免疫磁珠筛选是获得高纯度Muse细胞的良好高效的方法,Muse细胞可在大鼠损伤脊髓内大量存活4周并向损伤区迁移,且能持续改善大鼠运动功能,Muse细胞有望成为治疗脊髓损伤的一种新的种子细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许建中	郑州大学第一附属医院骨科	113	517	11.0	17.0
2	贺西京	西安交通大学第二附属医院骨科	297	1900	20.0	32.0
3	高正超	西安交通大学第二附属医院骨科	17	48	5.0	6.0
4	赵英杰	西安交通大学第二附属医院骨科	3	1	1.0	1.0
5	孙丽君	西安交通大学第二附属医院骨科	3	2	1.0	1.0
6	冷子宽	西安交通大学第二附属医院骨科	1	0	0.0	0.0
10	翟静静	西安交通大学第二附属医院骨科	1	0	0.0	0.0