脂质体方法用于modRNA转染各种类型细胞的初步研究

• 作者: 付炜 宫艺其 徐徐 王会景 王伟 艾雪峰 谭瑶 颜冰倩
• 来源期刊: 组织工程与重建外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 化学合成修饰信使核糖核酸 脂质体 基因表达 小鼠胚胎成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 373-378,383
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 4920字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2019.06.001

摘要

目的 筛选更优的脂质体转染试剂,探讨其用于modRNA转染各种类型细胞并表达所需目的蛋白的可行性.方法 分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,应用荧光显微镜、流式细胞分析仪检测并比较两种转染试剂的转染效率和蛋白表达效果.将更优的转染试剂用于modGFP转染其他各种类型细胞的实验中,采用同样的方法分析modGFP的转染效率及蛋白表达情况.将modGFP与modmCherry共转MEF细胞,荧光显微镜观察共转的情况.将modnGFP及modmTBX5转染MEF细胞,荧光显微镜观察核内蛋白的表达情况.结果 MEF细胞转染mod鄄GFP 24 h后,流式分析发现MessageMax的转染效率为(83.33％±3.23％),略高于RNAiMax的(78.77％±6.12％),两者没有统计学差异,但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂.MessageMax能将modGFP高效转染入3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞中,并实现modGFP和modmCherry在MEF细胞中的共转及核内因子nGFP和mTBX5在MEF细胞核中的定位.结论 相比于RNAiMax,MessageMax转染modRNA效果更佳,既能实现包括核内蛋白在内的各种目的蛋白在各类细胞中的高效、快速表达,也能实现多因子同时转染、共同表达.