电转方法用于modRNA转染细胞的初步研究

• 作者: 付炜 宫艺奇 王会景 王伟 艾雪峰 谭瑶 陈茂林 颜冰倩
• 来源期刊: 组织工程与重建外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 合成修饰的信使核糖核酸 电转法 最适电压 最适脉冲时间
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 215-221
• 页数: 7页
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 5562字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2019.04.001

摘要

目的 探讨电转方法用于modRNA转染细胞的可行性,并筛选出不同细胞电转所需的最适电压和脉冲时间.方法 ①筛选电转EGFP modRNA进入人成纤维细胞的最佳电压和脉冲时间参数;②在此基础上将人成纤维细胞转染nGFP/EGFP+mCherry modRNA;③将Hela、293T、3T3三种常见贴壁细胞电转EGFP modRNA.结果 ①人成纤维细胞电转modRNA的最适电压为440 V,最适脉冲时间为30 ms;②nGFP可在核内表达,EGFP和mCherry两种蛋白可同时在胞质中表达;③Hela、293T、3T3细胞电转最适电压分别为425 V、400 V和440 V,最适脉冲时间均为30 ms.结论 本实验证明①电转法转染modRNA进入细胞质和细胞核的可行性;②可同时将两种modRNA导入同一个细胞内并表达;③最适电压和最适脉冲时间需根据不同的细胞种类分别筛选.