幽门螺杆菌毒力因子VacA促进胃上皮GES-1细胞DNA同源重组修复

• 作者: 刘斌 孙向东 米阳 莫慧 薛福敏 郑鹏远
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 幽门螺杆菌 同源重组修复 GES-1细胞 VacA
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 417-424
• 页数: 8页
• 字数: 5646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2019.06.003

摘要

目的 检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)标准株(Hp P12)和其毒力因子VacA对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)DNA损伤和同源重组(homologous recombination,HR)修复的影响.方法 应用Hp P12和其vacA基因敲除株(Hp P12ΔvacA)以感染复数(multiplicity of infection,MOI)=100分别感染GES-1细胞,采用依托泊苷(50μmol/L)或丝裂霉素(0.5μg/ml)处理2 h的GES-1细胞作为阳性对照,Western blot和免疫荧光方法检测DNA损伤标记蛋白γH2AX、HR修复关键蛋白(Rad51、pMRE11、CtIP和pCtIP)的表达水平以及在DNA损伤位点的募集情况;进一步采用Hp P12和Hp P12ΔvacA菌株感染人胚肾HEK-293(DR-GFP)细胞系,验证VacA蛋白对HR修复的影响.结果 DNA损伤标记蛋白γH2AX的表达和募集,在Hp P12感染组较未感染组上调(P<0.05),在Hp P12ΔvacA感染组较标准株感染组下调(P<0.05).同样,HR修复关键蛋白(Rad51、pMRE11、CtIP和pCtIP)的表达和募集,在Hp P12标准株感染组较未感染组上调(P<0.05),在Hp P12ΔvacA感染细胞中较标准株下调(P<0.05).进一步采用上述菌株感染I-SceⅠ质粒转染的HEK-293(DR-GFP)细胞进行验证,发现Hp P12感染组绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞数下调,而Hp P12ΔvacA感染组下调更加明显(P<0.05).结论 Hp P12标准株感染胃上皮GES-1细胞后引起DNA损伤,促进了GES-1细胞中的HR修复,其中VacA毒力因子起到促进HR修复的重要作用.