利用CRISPR/Cas9技术构建ALK7LoxP/LoxP小鼠品系

• 作者: 刘灯泉 唐梦熊 戴红艳 李毅辉 管军 赵强
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 活化素受体样激酶7基因 LoxP序列 组织特异性敲除
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 方法学研究
• 页码范围: 69-74
• 页数: 6页
• 分类号: Q81|R5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2019.01.014

摘要

目的 利用CRISPR/Cas9技术将LoxP序列靶向导入小鼠活化素受体样激酶7(ALK7)基因,构建ALK7LoxP/LoxP小鼠,与组织特异性Cre小鼠杂交,获得时空特异性ALK7基因敲除小鼠,为研究ALK7在特定时间特定组织中的功能奠定基础.方法 利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠ALK7基因:设计合成识别ALK7基因外显子4-6上下游非编码序列的sgRNA.设计并合成LoxP-ALK7-LoxP打靶载体,测序正确后,显微注射法将体外合成的sgRNA、Cas9 mRNA和打靶载体注射到小鼠受精卵,移植受精卵至假孕小鼠输卵管代孕.获得仔鼠后通过PCR、Southern blot鉴定子代小鼠基因型,实时荧光定量PCR、Western blot检测ALK7转录表达水平.结果 获得了含有目的 基因的打靶阳性小鼠,并且插入的LoxP序列不影响ALK7的转录表达水平.结论 利用CRISPR/Cas9技术成功将LoxP序列靶向引入小鼠ALK7基因,成功构建ALK7LoxP/LoxP小鼠品系,为进一步构建组织特异性ALK7基因敲除小鼠模型奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	管军	青岛大学附属青岛市市立医院心内科	11	36	4.0	6.0
2	刘灯泉	青岛大学附属青岛市市立医院心内科	2	1	1.0	1.0
3	赵强	青岛大学附属青岛市市立医院心内科	6	12	3.0	3.0
4	唐梦熊	山东大学齐鲁医院急诊科	7	5	1.0	1.0
5	戴红艳	青岛大学附属青岛市市立医院心内科	11	21	2.0	4.0
6	李毅辉	山东大学齐鲁医院重症医学科	2	2	1.0	1.0