重组胰高血糖素样肽-1载体的构建及其在枯草芽孢杆菌中的表达

• 作者: 丁艺 周天然 屠志刚 张安驰 徐梦娇 李昊翔 袁国跃 袁婧 赵丽 赵志聪 郭畅
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 胰高血糖素样肽-1 枯草芽孢杆菌 表达载体
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 195-200
• 页数: 6页
• 分类号: R587.1
• 字数: 4246字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y190035

摘要

目的:构建及鉴定携带His标签的重组胰高血糖素样肽-1(modified glucagon-like peptide-1,mGLP-1)表达载体,实现其在枯草芽孢杆菌WB800N中的分泌表达.方法:经化学合成得到含有His标签及BamHⅠ/XbaⅠ酶切位点的mGLP-1基因片段,将其酶切后插入含信号肽amyQ序列的大肠埃希菌枯草芽孢杆菌双穿梭载体pHT43中,得到重组载体pHT43-mGLP-1;通过电转化方法将质粒pHT43-mGLP-1转化到枯草芽孢杆菌WB800N中,构建含有目的基因的重组菌株WB800N/pHT43-mGLP-1,利用聚合酶链式反应(PCR)、碱基测序、甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)及蛋白质印迹法鉴定重组的枯草芽孢杆菌.结果:菌落PCR和测序结果表明,阳性克隆质粒pHT43-mGLP-1成功转化进枯草芽孢杆菌WB800N;Tricine-SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测表明,重组菌株WB800N/mGLP-1培养上清液中有mGLP-1蛋白表达,且1 mmol/L IPTG诱导下蛋白表达量明显增加.结论:成功构建了携带mGLP-1基因的表达载体并实现了其蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达,为后续动物实验和制备微生态活菌制剂奠定了基础.