Cx43在造血调控及重建中的作用

• 作者: 傅晋翔 周东明 张立莹 张阳敏 徐燕霞 罗筱衍
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 间隙连接蛋白43 基因敲除 造血调控 造血干/祖细胞 造血重建
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 738-743
• 页数: 6页
• 分类号: R551|R363.2
• 字数: 4516字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2019.04.025

摘要

目的:采用条件性基因敲除技术构建造血系统间隙连接蛋白43(Cx43)基因敲除(Cx43-/-)小鼠模型,并探讨Cx43在维持造血细胞自我更新及功能稳定中的作用.方法:将引进的2对转基因小鼠Cx43 loxP/loxP和Lyz-Cre/+杂交,选取F1雌性子代Cx43 loxP/-_Lyz-Cre/+与雄性Cx43 loxP/loxP合笼回配,提取所获得子代小鼠鼠尾组织基因组DNA,采用PCR方法鉴定小鼠基因型,RT-PCR方法筛选Cx43-/-小鼠,同时分析小鼠不同器官中Cx43基因的表达差异;该类小鼠经5-氟尿嘧啶(5-FU;125 mg/kg)处理,在化疗前及化疗后第5、10和15天经眼球取血分析其血象变化.Cx43-/-及Cx43+/+小鼠予7.5 Gy(60 Co-γ)的致死量照射,剂量率1 Gy/min,照射后6 h分别给予事先准备就序的骨髓细胞,每只3×106细胞于尾静脉注入,2周后处死小鼠检测造血是否重建:分离股骨切片后,收集骨髓细胞进行细胞表型分析(选用的单抗为CD45R、Gr-1、CD4、CD8a、TCRαβ、Mac-1、抗sIgM、TER119、Sca-1及CD117);同时进行体外造血细胞集落实验观察造血细胞的体外增殖能力.结果:本研究通过2种转基因小鼠间杂交和回交,成功获得造血系统选择性Cx43基因敲除小鼠;该类小鼠骨髓及外周血细胞无Cx43表达,参与造血的组织,如肝脏和脾脏中Cx43表达也显著下调(P<0.01),而心脏和肾脏的Cx43表达则无影响,小鼠成年后外周血象分析并无明显异常,但应急代偿能力下降,经5-FU处理后,其造血功能恢复显著减缓,处理15 d后,Cx43+/+小鼠造血功能已接近正常水平,而Cx43-/-小鼠仍无明显的恢复迹象,血红蛋白、白细胞及血小板仍处低位,2者差别有统计学显著性(P<0.01);体外集落试验也证实Cx43-/-小鼠造血干/祖细胞的增殖能力下降,其CFU-GM或CFU-E集落数均明显少于Cx43 Lin-/c-Kit+/Sca-1+/+小鼠(P<0.01),但流式细胞术结果显示,Cx43-/-小鼠骨髓中+细胞亚群数量与Cx43+/+小鼠相比差异并无统计学显著性;Cx43-/-小鼠在化疗或移植后其骨髓造血功能重建均延迟,且化疗15 d后骨髓切片及涂片均证实其骨髓中造血细胞增生程度明显降低,脂肪组织显著增多,而且T、B细胞发育也有异常.此外,其外周血中CD4 CD4+CD8+细胞比例比野生型小鼠增多(P<0.05),但+T细胞显著减少(P<0.01),尤其是TCRαβ亚群细胞减少最为明显(P<0.01).同样,Cx43 CD45R+sIgM-/-小鼠外周血中-细胞亚群比例与野生型小鼠相比显著减少(P<0.01).结论:骨髓中Cx43基因表达在造血干/祖细胞发育(尤其是应急状态时)具重要作用,敲除Cx43基因后造血干/祖细胞增殖减缓,造血及免疫重建功能受损.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	傅晋翔	苏州大学附二院血液科	110	424	11.0	14.0
2	张阳敏	苏州大学附二院血液科	5	12	2.0	3.0
3	张立莹	苏州大学附二院血液科	3	5	2.0	2.0
4	周东明	苏州大学附二院血液科	4	4	1.0	1.0
5	徐燕霞	苏州大学附二院血液科	3	3	1.0	1.0
6	罗筱衍	苏州大学附二院血液科	1	2	1.0	1.0