问号钩端螺旋体LA_2144基因产物PAF-AH和PLA2酶活性研究

• 作者: 严杰 孙爱华 张琴超 张金良 林旭瑷 胡玮琳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 问号钩端螺旋体 LA_2144基因 血小板活化因子乙酰水解酶 磷脂酶A2 酶活性
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 519-526
• 页数: 8页
• 字数: 5302字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2019.07.006

摘要

目的 了解问号钩端螺旋体LA_2144基因产物血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)和磷脂酶A2(PLA2)的酶活性.方法 生物信息学软件预测问号钩端螺旋体赖株LA_2144基因跨膜区、信号肽和结构域.构建无信号肽LA_2144基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2144后复性.采用分光光度法检测rLep2144水解PAF-AH底物2-thio PAF的活性及其Km和Kcat值以及水解PLA2底物花生四烯酸硫代卵磷脂的活性.采用实时荧光定量RT-PCR和West-ern blot法检测问号钩端螺旋体感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)后LA_2144基因转录、蛋白质表达和外分泌情况.结果 LA_2144基因无跨膜区但有信号肽和SGNH水解酶超家族结构域.所构建的无信号肽LA_2144基因原核表达系统能高效表达rLep2144,提纯后的rLep2144在分离胶上为单一蛋白质条带并成功复性.rLep2144有较强PAF-AH活性,其Km和Kcat值分别为688.235μmol/L和0.976/s,但PLA2活性较弱.问号钩端螺旋体感染HUVEC和EOMA后LA_2144基因mRNA转录和蛋白质表达水平迅速升高(P<0.05)且外分泌.结论 问号钩端螺旋体LA_2144基因产物具有较强PAF-AH活性和一定的PLA2活性,可在钩端螺旋体病出血性病变和炎症反应中发挥作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学和微生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	林旭瑷	浙江大学医学院病原生物学和微生物学系	28	47	4.0	5.0
3	张金良	金华职业技术学院医学院	15	34	3.0	5.0
4	胡玮琳	浙江大学医学院病原生物学和微生物学系	13	17	3.0	4.0
5	孙爱华	杭州医学院基础医学部	24	82	6.0	8.0
6	张琴超	浙江大学医学院病原生物学和微生物学系	1	0	0.0	0.0