IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究

• 作者: 乔松林 张改平 李学伍 李睿 李青梅 杨艳艳 滕蔓 王丽 赵东 邓瑞广 郭军庆
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 免疫过氧化物酶单层细胞试验 筛选 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 217-223
• 页数: 7页
• 分类号: S852.651
• 字数: 6662字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.20190199

摘要

为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体.用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12 h后用含3％H2 O2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板.以100μL/孔的量将融合后继续培养10 d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察.结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色.因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体.