猪瘟病毒重组酶聚合酶扩增检测方法的建立及应用

• 作者: 刘立兵 孟令宅 张若曦 李睿文 王建昌 王金凤 袁万哲 韩庆安 顾文源
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 5'UTR RT-RPA 等温扩增
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 687-693
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0113

摘要

本研究基于猪瘟病毒(CSFV)5'UTR保守序列,设计特异性引物,建立了可快速检测CSFV的反转录重组酶聚合酶扩增检测方法(reverse-transcription recombinase polymerase amplification,RT-RPA).该方法在40℃下恒温20 min即可完成反应;且特异性强,与其他瘟病毒和猪的重要病原无任何交叉反应.以体外转录的CSFV RNA为模板,该方法的检出下限为102 copies.采用RT-RPA方法和实时荧光RT-PCR(re-al-time RT-PCR)方法同时对57份临床样品进行CSFV检测,结果,RT-RPA方法的阳性检出率为56.14％(32/57),略低于real-time RT-PCR方法的阳性检出率(64.19％,37/57).以real-time RT-PCR作为参考方法,所建立的RT-RPA方法的诊断特异性为100％,诊断灵敏度为89.19％.上述结果表明,本研究建立的CSFV RT-RPA检测方法操作简单、反应快速,对没有装备荧光PCR仪地区的猪瘟诊断防控具有重要意义.