塞尼卡谷病毒重组酶聚合酶扩增技术(RPA)实时荧光检测方法的建立

• 作者: 刘春菊 吴晓东 哈登楚日亚 张志诚 樊晓旭 王姣 王志亮 王英丽 赵永刚 迟田英
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 塞尼卡谷病毒 实时 荧光 重组酶聚合酶扩增
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 81-86
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4513字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2017.08.022

摘要

塞尼卡谷病毒(Seneca valley virus,SVV)可感染猪,引起类似口蹄疫病毒感染造成的水疱性病变,新生仔猪病死率达30%~70%.本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),针对SVV 3D基因设计了引物和探针,并进行筛选、反应条件优化以及敏感性、特异性和重复性试验,建立了实时荧光RPA方法.结果显示,本方法在40℃、10 min内检测的最低浓度为28拷贝/μL;与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应;通过3次重复试验检测2.8×106~2.8×101拷贝/μL的6个稀释度样品,在荧光强度达1500 mV所需时间变异系数范围在2.44%~14.95%.该等温、快速扩增方法为猪群出现水疱性疾病的鉴别诊断提供了技术支持,对及时采取适当防控措施具有重要意义.