转基因大豆MON89788实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立

• 作者: 丁晨露 徐俊锋 汤婷 汪小福 祝旋 蔡健 谢实龙 马同富
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 转基因大豆MON89788 重组酶聚合酶扩增(RPA) qRT-PCR 快速检测 转基因大豆
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1301-1310
• 页数: 10页
• 分类号: S-3|Q31
• 字数: 3377字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.07.018

摘要

MON89788是较早被批准商业化种植的转基因大豆(Glycine max)品种,种植范围广,产品流通量大.本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),针对MON89788的转化体特异性序列设计了引物和探针,利用正反向引物筛选的方法获得了最佳引物组合,并对反应的温度、引物和探针的浓度进行了优化选择.结果 表明,RPA在29.5～43.1℃范围内都能扩增,对温度的容忍度较大,高浓度的探针会影响实时荧光RPA的扩增效率.同时对实时荧光RPA检测体系的特异性、灵敏度和适用性等进行测试,最终建立了MON89788实时荧光RPA检测方法.该检测方法特异性强,对MON89788的绝对检测限(absolute limit of detection,aLOD)可达到40拷贝,相对检测限(relative limit of detection,rLOD)为0.05％,对实际样品的检测在39℃,10 min内完成,是实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测时间的0.07～0.13倍.该恒温、快速的检测方法为转基因成分的快速检测提供了新的技术支持,有望用于转基因成分的现场快速检测.