miR-130b在胶质瘤对替莫唑胺耐药中的作用

• 作者: 叶汝勇 吕晓俊 周永刚 张静 李晓波 李正在 舒俊斌
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胶质瘤 微小RNA-130b 肿瘤坏死因子α 核因子κB 替莫唑胺 耐药性
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 597-605
• 页数: 9页
• 分类号: R739.41|R363.2
• 字数: 6868字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2019.04.004

摘要

目的:探讨微小RNA-130b(microRNA-130b,miR-130b)在胶质瘤细胞中的表达及其调控体外胶质瘤细胞对替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药中的作用.方法:利用RT-qPCR法检测miR-130b在胶质瘤细胞株U251、SHG-44和U87中的表达水平;计算TMZ对不同胶质瘤细胞株(U251、SHG-44和U87)的半数抑制浓度(IC50);通过不同浓度梯度的TMZ作用于体外U251细胞,从而获得相对稳定的对TMZ耐药的U251(U251/TMZ re-sistance,U251/TR)细胞,计算TMZ对U251/TR细胞的IC50及耐药指数(resistance factor,RF);使用miR-130b模拟物(miR-130b mimics)和miR-130b抑制物(miR-130b inhibitor)瞬时转染体外胶质瘤细胞;CCK-8法检测体外胶质瘤细胞的活力;流式细胞术检测胶质瘤细胞凋亡;通过生物信息学工具分析miR-130b可能的靶基因,萤光素酶报告基因实验测定萤光素酶活性;电泳迁移率变动分析检测核因子 κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的活性;Western blot法测定肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Bcl-2、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis pro-tein,XIAP)和survivin蛋白在胶质瘤细胞中的表达水平.结果:TMZ对不同胶质瘤细胞株(U251、SHG-44和U87)的IC50分别为54.8、94.8和149.6μmol/L;TMZ对U251/TR细胞的IC50为(446.5±61.3)μmol/L,其RF为8.1;转染miR-130b mimics可明显增强TMZ对U251/TR细胞的生长抑制和凋亡诱导作用;转染miR-130b inhibitor可显著抑制TMZ对U251/TR细胞的生长抑制和凋亡诱导作用;萤光素酶报告基因实验验证TNF-α是miR-130b的直接作用靶点;与mimics NC组相比,转染miR-130b mimics后U251/TR细胞中的NF-κB活性及TNF-α、Bcl-2、XIAP和sur-vivin蛋白表达均明显下调;与inhibitor NC组相比,转染miR-130b inhibitor后U251细胞中的NF-κB活性及TNF-α、Bcl-2、XIAP和survivin蛋白表达均显著上调(P<0.05);NF-κB抑制剂Bay 11-7082可增强TMZ对U251/TR细胞凋亡的诱导作用.结论:miR-130b在耐药型胶质瘤细胞中表达下调,并通过靶向调控TNF-α/NF-κB通路增强TMZ对体外胶质瘤细胞的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶汝勇	永康市第一人民医院神经外科	3	8	1.0	2.0
2	李正在	浙江省肿瘤医院脑外科	2	1	1.0	1.0
3	张静	永康市第一人民医院神经外科	1	1	1.0	1.0
4	周永刚	永康市第一人民医院神经外科	2	7	1.0	2.0
5	舒俊斌	永康市第一人民医院神经外科	2	7	1.0	2.0
6	李晓波	永康市第一人民医院神经外科	2	7	1.0	2.0
7	吕晓俊	永康市第一人民医院神经外科	2	7	1.0	2.0