利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立FcγR基因 大片段敲除小鼠模型

• 作者: 刘甦苏 吕建军 吴曦 曹愿 柳全明 范昌发 谷文达 霍桂桃
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 FcγR基因 大片段敲除 小鼠
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 583-591
• 页数: 9页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 5598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2019.05.006

摘要

目的 使用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除长度约为90 kb的小鼠FcγR2b,FcγR3,FcγR4基因簇,为构建FcγR基因人源化小鼠奠定基础.方法 使用在线预测软件在FcγR2b,FcγR3外显子区设计sgRNA,在每一位点挑选脱靶效应较低的五个候选sgRNA.通过CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA在体外的活性.选取活性较高的sgRNA体外转录,与Cas9 mRNA一并注射受精卵.通过PCR检测及测序,得到1只敲除片段为89711 bp的基因修饰小鼠,且同时敲除FcγR2b基因5'端,FcγR3基因3'端及FcγR4基因.而且还利用软件预测了8个脱靶可能性最高的位点,并对首建鼠基因组的上述8个脱靶位点全部测序确认.结果 结果显示未在预测脱靶位点附近发现小片段插入或缺失.结论 建立了利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除基因组超大片段的技术,该技术结合BAC转基因技术,将为建立含有复杂基因族的人源化小鼠提供新的途径.