核受体结合因子2对自噬起始复合物PI3KC3-C1活性的调节作用

• 作者: 李杏 汤在明 留筱厦 钟清 魏佳乐
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 核受体结合因子2 Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶复合物Ⅰ 激酶活性检测 自噬调控
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1243-1247
• 页数: 5页
• 分类号: Q291
• 字数: 4393字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2019.11.005

摘要

目的·研究核受体结合因子2(nuclear receptor-binding factor 2,NRBF2)的不同磷酸化水平对Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶复合物Ⅰ(classⅢphosphatidylinositol 3-kinase complexⅠ,PI3KC3-C1)的活性影响,寻找一种活性最高的PI3KC3-C1作为自噬特异性小分子抑制剂筛选的靶标.方法·首先通过建立体外蛋白纯化体系,分别获得四元不含NRBF2的PI3KC3-C1和五元包含不同磷酸化水平NRBF2的PI3KC3-C1,通过凝胶过滤色谱检测复合物的完整性,然后体外测定纯化的不同PI3KC3-C1的激酶活性差异,观察NRBF2的磷酸化对PI3KC3-C1活性的影响.结果·纯化的PI3KC3-C1具有良好的纯度和产量.包含NRBF2的五元PI3KC3-C1表现出比四元的蛋白复合物更高的激酶活性,其中包含持续去磷酸化NBRF2的PI3KC3-C1具有最高的酶活性.结论 ·NRBF2确实作为PI3KC3-C1的组分之一稳定存在,NRBF2的存在可提升PI3KC3-C1的激酶活性;包含持续去磷酸化NRBF2的PI3KC3-C1可以作为一种新的自噬调控靶标,用来筛选自噬特异性小分子抑制剂.